2-D DIGE


2-D荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)由二维凝胶电泳演变而来,它带有一种内标,从而使得所有的样品-甚至是那些在不同凝胶上运行的样品-能够容易的比较和精确的定量。

为了进行2-D DIGE,用不同的CyDye DIGE Fluors标记您的蛋白样品和内标。在每块凝胶上运行内标和最多两种样品。使用内标-以及在同一块凝胶上运行多种样品-最终意味着更少的凝胶、较少的动手操作、以及显著的成本节约。

左边的图片是2-D DIGE蛋白质点状图谱。

  • 通过内标进行归一化,可以减少实验中凝胶和凝胶之间的差异,从而不需要进行技术上重复。
  • 增加通量并显著地减少分析的时间和成本。
  • 用1/6的2-D凝胶获得更佳可靠的结果(每块凝胶包含内标和两种样品)。
  • 用大于95%的统计置信度检测蛋白表达的真正差异。

内标是通过将所有的样品等量混合成一个样品制成的,并且同时在每个2-D DIGE凝胶上运行。这意味着在凝胶上的每个点都有一个对应的标准品,并且在一次同样的实验中所有的凝胶都是定量相关的。当您有几个样品时,2-D电泳因需要大量的重复会变的非常麻烦。由于内标在本质上减少了凝胶和凝胶之间的变化,当您在进行2-D DIGE时就无需技术重复。

第一步是用荧光素标记您的蛋白样品。在传统的2-D电泳中,蛋白是电泳完之后再进行染色,而在2-D DIGE中,蛋白的标记步骤是在进行电泳之前利用CyDye DIGE Fluors进行染色。第一维电泳和第二维电泳的进行与传统的2-D电泳相似,比如利用一个IEF系统、IPG条带、以及一个电泳系统。

使用能够检测多重荧光的生物分子成像仪进行2-D DIGE凝胶的图像分析比如Typhoon FLA 9500。

使用优化用于2-D DIGE的ImageMaster 2D Platinum差异分析软件进行分析。

Filter characteristics and typical properties

The selection of a laboratory filter depends on the conditions and objectives of your experiment or analytical procedure. The three most important characteristics of any laboratory filter are:

  • Particle retention efficiency
  • Fluid flow rate through the filter
  • Loading capacity

According to your particular application, other important filter characteristics may also require examination, for example wet strength, chemical resistance, purity, and ash level. 

Typical properties of filter papers and glass fiber filters

Membrane materials

Chemical compatibility chart of membranes and housings


Filtration Methods for flat filters

  Gravity Vacuum Pressure
Cellulose Filter Papers Suitable Suitable Not generally used
Glass Microfiber Not suitable Suitable Suitable
Membranes Not suitable Suitable Suitable


Maximum practical volumes of cellulose filter paper circle sizes (quadrant folded)

Volume (ml) 15 20 35 75 135 300
Filter Diameter (mm) 90 110 125 150 185 240

 

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