探针标记

一个特定的探针用于定位印迹上的目标片段或确定目标片段的数量。

探针可以是天然或合成DNA或RNA,用于Southern印迹的探针经常是一段短的合成寡核苷酸(长度至少是25个互补的碱基),用于Northern印迹的探针包括用标记的靶向RNA序列的引物合成的互补DNA(cDNA)和在体外转录的RNA(核糖核酸探针)

探针的选择要考虑多种因素,比如灵敏度、定量需求、易用性以及实验时间。


放射性探针

放射性标记,多数采用酶法标记32P, 33P或35S。放射性标记是提供用于最高灵敏度检测的方法,允许检测到0.01pg。

非放射性探针

间接非放射性标记将探针固定到一个直接抗一种酶的抗体上,之后这个固定的探针能够用酶检测到,该酶能够降解ECL化学发光或化学荧光的底物以产生光信号。或者探针能够用生物素标记,使得它能够被一种链霉亲和素/亲和素酶结合物检测到。

直接放射性标记将探针连接到某种酶上(比如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶),它能够利用ECL化学发光或化学荧光的底物产生光信号而被直接检测到。

探针也可用荧光素进行标记用于荧光检测。

    检测方法 优点 缺点
    放射性检测
    • 高灵敏度(低至0.01pg)
    • 信号与靶点成比例
    • 较少的步骤
    • 严格的实验室程序
    • 废弃物有污染
    • 有限的探针贮存寿命
    非放射性-间接检测
    • 方便
    • 通过信号的放大,增加灵敏度
    • 比放射性标记的步骤更多
    非放射性-直接检测
    • 方便
    • 通过信号的放大,增加灵敏度
    • 更少的孵育和洗涤步骤
    • 比放射性标记步骤更多
    荧光检测
    • 信号与靶点成比例
    • 多种探针(荧光素)
    • 较少的步骤
    • 需要激光扫描仪,比如Typhoon

Cytiva 人类细胞模型

心脏毒性和肝脏毒性是导致药物开发过程中药物安全责任和药物撤回的常见原因。Cytiva心肌细胞来源于美国国立卫生研究院批准的人胚胎干细胞(hES),它们提供了大量并可靠的用于心脏安全和毒性测试的生物学相关细胞的来源。