蛋白纯化技术

直到20世纪初,典型的分离技术包括沉淀、过滤和结晶


自从现代液相层析的出现,几乎不再单独使用这些早期的技术。现在通常使用多种技术的结合以确保目的蛋白的产量、质量和纯度。

如今,有很多的蛋白沉淀的方法被频繁地使用。用中性盐(比如硫酸铵)沉淀蛋白对从提取物中纯化和富集靶蛋白且不失活性非常有用。

在工业规模中,20世纪40年代发明的Cohn’s冷乙醇分馏/沉淀方法至今仍用于生产人血清白蛋白、免疫球蛋白和其他基于血液的产品。由于提供更高的纯度和产量以及更容易进行自动化,层析方法与超滤相结合已经开始取代Cohn分馏。

    很多生物制药的生产都是利用基于细胞培养的工艺,这些工艺被分成细胞培养、分离和形成配方等步骤。分离步骤则被典型地分为两个不同的操作 - 回收和纯化。回收操作广泛地利用不同的过滤技术以从颗粒中分离包含产品的流体或者用于裂解前收获细胞。

    过滤-离心结合使用用于实验室和工业规模中许多的分离和纯化。离心超滤能够用于实验室规模以浓缩小的样品,而在更大的规模上,这种结合能够保护和维持昂贵的层析柱和介质的性能。

    工业上蛋白分离经常涉及到液相层析,在过去几十年中,已开发了多种层析技术。这些技术通过利用目的蛋白的物理或化学性质和样品溶液中其他物质的性质发挥作用。点击此处了解不同的层析技术

    Strep-tag™ II标签蛋白纯化

    Strep-tag™ II是一个只有8个氨基酸的小标签,它的相对分子量只有1000。它的小尺寸非常有好处,因为在绝大多数情况下它不会干扰结构和功能研究,因此无需去除。

    Strep-tag™ II特异性地结合拥有固定在琼脂糖基底基质的StrepTactin™配体的StrepTactin™ Sepharose High Performance以获得到纯净的靶蛋白。Strep-tag™ II与固定配体的结合亲和力是链霉亲和素的近100倍,使其适合于纯化Strep-tag™ II蛋白。在生理条件下进行纯化,含有脱硫生物素的温和洗脱液保留了靶蛋白的活性。

    了解更多关于Strep-tag™ II标签蛋白的纯化的信息。

    MBP-标签蛋白纯化

    麦芽糖结合蛋白(MBP)是一种有用的亲和标签,它们能增加生成靶蛋白的表达水平和溶解性。MBP标签也促进依附蛋白合适的折叠。因为MBP能增加溶解性,这个标签对以不溶形式(包涵体)聚集的重组蛋白特别有用。

    亲和纯化在生理条件下发生,并且使用麦芽糖进行温和地洗脱。温和的洗脱能保留住MBP标签蛋白的活性。

    了解更多用于MBP标签蛋白纯化的产品。

    GST-标签蛋白纯化

    谷胱甘肽s-转移酶(GST) 基因融合系统是用于从大肠杆菌中生产的GST-标签蛋白的表达、纯化和检测的通用系统。可在非常温和的条件下对GST-标签蛋白进行纯化,从而保留靶蛋白的功能和抗原性。

    GST标签可能增加靶蛋白的溶解性和稳定性。GST标签很大,其相对分子量(Mr)为26000。一段特殊的切割序列允许在纯化后用不同的蛋白酶简单地去除GST标签。

    GST-标签蛋白的典型特点包括与谷胱甘肽琼脂糖层析介质上的谷胱甘肽配体高特异性的结合,一个步骤就能使洗脱的靶分子的纯度超过90%

    了解更多用于GST-标签蛋白纯化的产品。

    不带标签或天然蛋白的纯化

    不带标签重组或天然蛋白经常需要一个多步纯化步骤以获得足够的纯度。这些蛋白可能来源于天然原料或者不带标签的过表达,因为标签的存在会干扰蛋白的应用。

    纯化策略-捕获、中间纯化和精细纯化(CIPP)-是一种简化蛋白纯化计划和执行的工具。这个策略给出的指南用于如何以最好的方式结合纯化方法从而达到设定的目标。

    在蛋白纯化策略页面了解更多关于CIPP的信息。

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