蛋白纯化

通过通用的亲和标签纯化使蛋白纯化发生了革命性改变,今天许多的蛋白质能够非常容易和高效地纯化。

在研究实验室中,在微克和毫克的规模进行蛋白质纯化。而工业规模的生物工艺的规模可达数千克或甚至数吨。蛋白的制备型纯化通常涉及层析,GE医疗提供一系列层析介质用于手动方法或使用自动层析系统纯化蛋白。我们的工具包含一系列预包装的形式以进行方便的蛋白纯化,比如重力层析柱、离心式层析柱、96孔板,以及用于自动层析系统的预装柱。

本页面将给您一个蛋白纯化策略和工具的概览,您可以利用这些纯化带标签或不带标签的蛋白。关于蛋白纯化的分步步骤和实用技巧,下载我们进阶手册观看我们的蛋白纯化视频。

如果您正在教授蛋白纯化,您可以在我们的蛋白质纯化教育网站找到有帮助的资源。

抗体纯化

我们提供用于不同来源单克隆和多克隆抗体纯化的工具。抗体亲和纯化的基础是protein G和protein A对不同物种IgG的Fc区域的高亲和力和特异性。我们提供带有固定在一些不同基质的protein G和protein A的层析介质,从而提供一种从腹水、细胞培养上清和血清中分离IgG和IgG亚类的卓越方法。

我们也提供带有重组protein L配体的层析介质用于抗体和抗体片段的纯化。Protein L对kappa轻链的可变区有很强的亲和力,能够广泛用于捕获抗体片段比如Fab片段、单链可变区片段(scFv)和结合域抗体(Dabs)。

了解更多用于抗体亲和层析的产品。

    组氨酸标签蛋白纯化

    由于组氨酸标签很小并几乎不会干扰目的蛋白的功能、活性或结构,因此被广泛使用。固定化金属离子亲合层析(IMAC)是纯化组氨酸标签蛋白最常用的方法。选择性地负载共价金属离子(比如镍或钴)的IMAC层析介质能够截留组氨酸标签蛋白,并在变性条件下,能从包涵体中纯化出不溶性的组氨酸标签蛋白。成功的IMAC纯化能得到高纯度、高产率、高活性的目的蛋白。

    因为很多蛋白质有内在的组氨酸和/或半胱氨酸氨基酸残基,其他非特异的蛋白能够与目的蛋白一起结合到IMAC填充介质上。这种情况下,需要经常通过改变溶液中咪唑的浓度来优化结合、洗涤和洗脱的条件。增加结合和洗涤缓冲液中咪唑的浓度通常会降低非特异性结合,而更低的浓度则导致更强的亲和相互作用。找到合适的平衡非常关键。

    了解更多用于组氨酸标签蛋白纯化的产品。

    Strep-tag™ II标签蛋白纯化

    Strep-tag™ II是一个只有8个氨基酸的小标签,它的相对分子量只有1000。它的小尺寸非常有好处,因为在绝大多数情况下它不会干扰结构和功能研究,因此无需去除。

    Strep-tag™ II特异性地结合拥有固定在琼脂糖基底基质的StrepTactin™配体的StrepTactin™ Sepharose High Performance以获得到高纯度的目的蛋白。Strep-tag™ II与该配体的结合亲和力是链霉亲和素的近100倍,使其适合于纯化Strep-tag™ II蛋白。在生理条件下进行纯化,含有脱硫生物素的温和洗脱液保留了目的蛋白的活性。

    了解更多关于Strep-tag™ II标签蛋白的纯化的信息。

    MBP-标签蛋白纯化

    麦芽糖结合蛋白(MBP)是一种有用的亲和标签,它们能增加生成目的蛋白的表达水平和溶解性。MBP标签也促进依附蛋白合适的折叠。因为MBP能增加溶解性,这个标签对以不溶形式(包涵体)聚集的重组蛋白特别有用。

    亲和纯化在生理条件下发生,并且使用麦芽糖进行温和地洗脱。温和的洗脱能保留住MBP标签蛋白的活性。

    了解更多用于MBP标签蛋白纯化的产品。

    GST-标签蛋白纯化

    谷胱甘肽s-转移酶(GST) 基因融合系统是用于从大肠杆菌中生产的GST-标签蛋白的表达、纯化和检测的通用系统。可在非常温和的条件下对GST-标签蛋白进行纯化,从而保留目的蛋白的功能和抗原性。

    GST标签可能增加目的蛋白的溶解性和稳定性。GST标签很大,其相对分子量(Mr)为26000。一段特殊的切割序列允许在纯化后用不同的蛋白酶简单地去除GST标签。

    GST-标签蛋白的典型特点是与谷胱甘肽琼脂糖层析介质上的谷胱甘肽配体高特异性的结合,一个步骤就能使洗脱的目的分子的纯度超过90%

    了解更多用于GST-标签蛋白纯化的产品。

    不带标签或天然蛋白的纯化

    不带标签的重组或天然蛋白经常需要多步纯化以获得足够的纯。这些蛋白可能来源于天然材料或由于标签存在会影响蛋白应用而进行的不带标签的过表达。

    纯化策略-捕获、中间纯化和精细纯化(CIPP)-是一种简化蛋白纯化策略和工具。这个策略给出的指南用于如何以最好的方式结合纯化方法从而达到设定的目标。

    在蛋白纯化策略页面了解更多关于CIPP的信息。

我们也提供特定的层析介质,这些介质有预先固定结合特定的分子种类比如丝氨酸蛋白酶、S-转移酶和钙调蛋白必需酶的配体。了解更多我们广泛的族特异性层析介质。

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