蛋白样品制备

样品制备流程最起始的步骤就是蛋白提取,提取方法通常包括了温和的非离子型去垢剂、不同的盐离子、稳定剂、螯合剂、还原剂和蛋白酶抑制剂等不同缓冲液成分。

选择正确的蛋白酶抑制剂对于保证高的蛋白得率,保护蛋白结构和活性至关重要。核酸酶能够有效去除核酸,另外还需要对样品进行精心地除杂,去掉那些对后续分析有干扰的去垢剂等杂质。

有效和正确的蛋白样品制备对于后续的分析检测(质谱、双向电泳、SDS-PAGE电泳、胰酶消化或色谱分析)成功与否至关重要。

对目标蛋白的有效富集能够极大地提高天然蛋白或重组蛋白的检测信号强度。

GE医疗提供了种类广泛的亲和层析产品用以蛋白质的富集。可以使用预装柱或96-孔板柱形式的亲和层析填料产品,便捷地捕获标签重组蛋白。也可以选择Mag Sepharose系列的磁珠产品用来纯化标签蛋白和富集磷酸化肽段。

样品浓缩可以有效提高每次分析的上样总量。使用Vivaspin™样品浓缩离心管可以将样品浓缩高达30倍,而且目标蛋白的回收率通常可以保持在95%以上。

    一般来讲,对于培养的动物细胞和血细胞只需要采取温和的裂解方式即可,而对于细菌、植物细胞、动物组织则需要剧烈的方法。裂解缓冲液中应加入蛋白酶抑制剂以防止细胞分解时释放的内源蛋白酶对蛋白的降解。

    根据细胞类型和您实验的总的目的,我们提供一系列的试剂盒和缓冲液用于裂解和蛋白提取以满足不同的需要。参考组织细胞裂解和蛋白提取产品列表或浏览我们所有的组织细胞裂解和蛋白提取产品页面。

核酸、多糖和盐离子等成分会干扰后续的蛋白质分析,例如电泳等。对样品进行除杂处理可以有效提高后续分析的数据质量。基于凝胶过滤原理的脱盐柱产品可以一步快速完成样品的脱盐,同时使样品处于后续分析要求的缓冲液中。

DNase可以解决由于核酸释放导致的样品粘稠问题。血清或血浆样品中含有的高丰度蛋白(白蛋白、IgG)能掩盖低丰度蛋白的检测信号。HiTrap Albumin 和IgG Depletion预装柱设计用于去除样品中这些高丰度蛋白,能分别去除超过95%的白蛋白和90%的IgG。

蛋白定量分析对总蛋白的浓度准确定量有严格的要求,例如在电泳分析中就要求每个泳道都上样相同量的总蛋白。很多基于分光光度计的蛋白定量方法在样品兼容性和数据准确性方面存在问题。2-D Quant Kit,非常适合包括电泳分析在内的多种蛋白质分析的样品精确定量。

Filter characteristics and typical properties

The selection of a laboratory filter depends on the conditions and objectives of your experiment or analytical procedure. The three most important characteristics of any laboratory filter are:

  • Particle retention efficiency
  • Fluid flow rate through the filter
  • Loading capacity

According to your particular application, other important filter characteristics may also require examination, for example wet strength, chemical resistance, purity, and ash level. 

Typical properties of filter papers and glass fiber filters

Membrane materials

Chemical compatibility chart of membranes and housings


Filtration Methods for flat filters

  Gravity Vacuum Pressure
Cellulose Filter Papers Suitable Suitable Not generally used
Glass Microfiber Not suitable Suitable Suitable
Membranes Not suitable Suitable Suitable


Maximum practical volumes of cellulose filter paper circle sizes (quadrant folded)

Volume (ml) 15 20 35 75 135 300
Filter Diameter (mm) 90 110 125 150 185 240