样品制备

样品制备是Western印迹工作流程的第一步,为获得高质量的结果奠定基础。样品可以不同的方式来制备,取决于起始材料的性质以及分析的预期目标。

样品制备的主要原理是保证样品处于最佳状态以及分析所需的最佳纯度水平。

生物基质通常是非常复杂的,目的蛋白可能是其中成千上万个分子中的小部分,除了核酸,多糖类,以及脂质,所有这些物质都会妨碍最终蛋白的分析。从细胞裂解,蛋白提取,到样品纯化,我们提供一系列产品用于裂解细胞,准备细胞内容物,之后通过Western印迹进行分析。

浏览我们的蛋白样品制备产品或者去我们的蛋白样品制备部分以了解更多。

  • 一个内标实质上减少实验凝胶和凝胶之间的变化。不需要进行技术上的重复以确定蛋白丰度的差异。
  • 增加通量并显著地减少分析的时间和成本。
  • 用少得多的2-D凝胶获得可靠的结果(每块带有内标的凝胶将多元化两种样品)。
  • 用非常高的统计置信度检测蛋白表达的真正差异。

内标是通过将所有的样品放到一个实验中制成的,并且在每个2-D DIGE凝胶上进行运行。这意味着在凝胶上的每个点都有一个标准品,并且在一次同样的实验中所有的凝胶都是定量相关的。当您有几个样品时,2-D电泳因需要大量的重复会变的非常麻烦。由于内标在本质上减少了凝胶和凝胶之间的变化,当您在进行2-D DIGE时就无需技术重复。

第一步是用荧光素标记您的蛋白样品。在传统的2-D电泳中,蛋白是电泳完之后再进行染色,而在2-D DIGE中,蛋白的标记步骤是在进行电泳之前利用CyDye DIGE Fluors进行染色。第一维电泳和第二维电泳的进行与传统的2-D电泳相似,比如利用一个IEF系统、IPG条带、以及一个电泳系统。

使用能够检测多重荧光的生物分子成像仪进行2-D DIGE凝胶的图像分析比如Typhoon FLA 9500。

使用优化用于2-D DIGE的DeCyder 2-D差异分析软件进行分析。

Filter characteristics and typical properties

The selection of a laboratory filter depends on the conditions and objectives of your experiment or analytical procedure. The three most important characteristics of any laboratory filter are:

  • Particle retention efficiency
  • Fluid flow rate through the filter
  • Loading capacity

According to your particular application, other important filter characteristics may also require examination, for example wet strength, chemical resistance, purity, and ash level. 

Typical properties of filter papers and glass fiber filters

Membrane materials

Chemical compatibility chart of membranes and housings


Filtration Methods for flat filters

  Gravity Vacuum Pressure
Cellulose Filter Papers Suitable Suitable Not generally used
Glass Microfiber Not suitable Suitable Suitable
Membranes Not suitable Suitable Suitable


Maximum practical volumes of cellulose filter paper circle sizes (quadrant folded)

Volume (ml) 15 20 35 75 135 300
Filter Diameter (mm) 90 110 125 150 185 240

 

特色产品区域