核酸印迹:Southern Blotting和Northern Blotting

电泳之后,核酸从凝胶转移到印迹膜上,并在膜上得到固定。中性或正电荷的Hybond尼龙膜(或Nytran尼龙膜)是用于核酸转移的高性能标准印迹膜。

不管是在印迹之前还是印迹的过程中,大于15kb的DNA经过酸处理可能会片段化,这个过程会使DNA脱嘌呤,将它打断成更小的片段使其能从凝胶上更有效的转移。凝胶中DNA可能也会变性成单链,从而提高带负电荷的DNA结合到带正电荷的膜上的能力,同时也增强与探针的杂交。碱变性也能破坏任何残留的仍存在于DNA中的RNA

通常可运用“真空快速印迹”或“毛细管印迹法”来实现


琼脂糖凝胶置于由多孔屏支撑的印迹膜上,如Hybond印迹膜。真空用于支撑屏之下,将核酸片段从凝胶上吸出并转到印迹膜上。真空印迹简化了脱嘌呤和变性步骤中使用的溶液对凝胶的处理。

印迹进行完毕之后,印迹膜置于真空或常规烤箱进行烘烤,或者暴露于紫外辐射下以永久地将转移的DNA或RNA吸附到膜上。

琼脂糖凝胶放置在浸在装有转移缓冲液的容器中的滤纸。Hybond印迹膜膜置于凝胶和3MM印迹滤纸之间。印迹滤纸通过毛细管作用将转移缓冲液吸引并通过凝胶,核酸分子被缓冲液携带着通过凝胶并固定到印迹膜上。

Cytiva 人类细胞模型

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